眾所周知細(xì)胞培養(yǎng)基的種類繁多，細(xì)胞培養(yǎng)方式也較多，如何正確地使用培養(yǎng)基及*大程度地保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)每個(gè)培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細(xì)胞種類的不同而存在差異。
在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作之前呢，我們先來(lái)了解一些細(xì)胞的基本知識(shí)吧！
組織培養(yǎng)實(shí)際的保存會(huì)影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)速度！
動(dòng)物血清應(yīng)儲(chǔ)存于–5至–20°C。培養(yǎng)基儲(chǔ)存于2至8°C；請(qǐng)?jiān)谕扑]的保質(zhì)期內(nèi)用完。請(qǐng)將完全培養(yǎng)基（加入添加劑）保存于2 至 8°C，推薦的存放期限為2至4周。此外，盡量減少血清和培養(yǎng)基暴露于光線下的時(shí)間。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程*重要的有兩點(diǎn)：一是無(wú)菌無(wú)污染；二是穩(wěn)態(tài)環(huán)境。
無(wú)菌操作：無(wú)菌操作很重要，這對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)影響很大。不要以為加入雙抗或三抗就可以了。雙抗或三抗的添加不僅對(duì)細(xì)菌或真菌的耐受性增加了，更容易染菌。其次抗生素添加的含量對(duì)細(xì)胞生命代謝是有一定的毒性作用的，尤其是在做轉(zhuǎn)染的時(shí)候。
那么無(wú)菌操作該怎么做才能盡可能的防止被污染？
首先是超凈工作臺(tái)的擺放已以及及時(shí)滅菌。里面應(yīng)盡可能少擺放一些沒(méi)用的東西，比如槍頭、離心管等。工作臺(tái)內(nèi)右邊擺放一瓶75%的酒精，左邊擺放一包無(wú)菌擦拭紙，15ml和50ml兩個(gè)管架，正前方擺放各量程的移液槍，以及一盞酒精燈。每次使用前后均用75%酒精噴灑，擦手紙擦拭，紫外含臭氧滅菌30min。
其次是操作過(guò)程的細(xì)節(jié)注意。將培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)75%酒精擦拭后放入工作臺(tái)的左邊，垃圾桶噴灑75%酒精后放在*右邊，槍頭噴灑75%酒精放于右中間，含有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶75%酒精擦拭后放置于左中間，將酒精燈放于正中間并點(diǎn)燃，培養(yǎng)瓶打開(kāi)過(guò)火放于酒精燈旁開(kāi)始傳代或換液等操作。整個(gè)過(guò)程盡可能靠近火源，以*快的速度操作完。
*后培養(yǎng)箱每隔一段時(shí)間進(jìn)行清洗消毒滅菌操作，保證培養(yǎng)環(huán)境無(wú)菌。
穩(wěn)態(tài)環(huán)境的培養(yǎng)：培養(yǎng)基和血清的的選擇很重要，一般能用進(jìn)口盡量選擇進(jìn)口的。國(guó)內(nèi)很多產(chǎn)品處理的效果不如國(guó)外的，對(duì)于原代細(xì)胞培養(yǎng)尤為重要。買來(lái)的培養(yǎng)基和血清應(yīng)及時(shí)分裝以保證無(wú)菌。切勿使用37℃水浴加熱，應(yīng)在4℃冰箱慢慢融化，避免影響血清的質(zhì)量。血清*好使用胎牛血清，添加含量為10%，不宜過(guò)高，短時(shí)間可以，長(zhǎng)時(shí)間容易毒害細(xì)胞造成細(xì)胞分化和衰老。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程不能過(guò)于頻繁換液，應(yīng)隔3天左右更換或者培養(yǎng)基顏色變黃，所以應(yīng)每天都去觀察細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，及時(shí)處理。
拿到發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？
收到發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞細(xì)胞后先不要開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議對(duì)收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況。
收到發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度：如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，剩余培養(yǎng)液可與新配制的培養(yǎng)液按一定的比例混合使用，待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后可替換成新配制的培養(yǎng)液；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
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