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BK試劑盒ELISA
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免疫組化操作步驟 
(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn):BK試劑盒ELISA
  方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法: 
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。 
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。   
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。   
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。  
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。 
方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法: 
 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,   每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。  
 ↓   加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔   中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)  
 ↓   于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)**抗體(抗抗體)0.1ml,   37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*后一遍用DDW洗滌。  
 ↓   其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。 
 試劑器材 BK試劑盒ELISA
  1. 試劑   (1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):   NaHCO3 1.59克   NaHCO3 2.93克   加蒸餾水至1000ml 
 (2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M   KH2PO4 0.2克   Na2HPO4·12H2O 2.9克   NaCl 8.0克   KCl 0.2克   Tween-20 0.05% 0.5ml   加蒸餾水至1000ml   
 (3) 稀釋液:   牛血清白蛋白(BSA) 0.1克   加洗滌緩沖液至100ml   或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使
 (4) 終止液(2M H2SO4):   蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。  
 (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):   0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml   0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml   加蒸餾水50ml。
 (6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:   TMB(10mg/5ml無(wú)水乙醇)0.5ml   底物緩沖液(PH5.5) 10ml   0.75%H2O2 32μl   
 (7) ABTS使用液:   ABTS 0.5mg   底物緩沖液(PH5.5) 1ml   3%H2O2 2μl  
 (8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。 
 (9) 正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。 
  2. 器材:  
 (1) 聚苯乙烯塑料板(簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,ELISA檢測(cè)儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。   
 (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。   
 (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。BK試劑盒ELISA
影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)、Elisa試劑盒測(cè)定技術(shù)的發(fā)展  臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展,
而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前,分子生物學(xué)正在并*終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)**而徹底的認(rèn)識(shí),
其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。
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