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PA317小鼠胚胎成纖維細胞
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PA317 小鼠胚胎成纖維細胞
PA317 小鼠胚胎成纖維細胞是生命科學研究中的重要工具細胞,由原代小鼠胚胎成纖維細胞經(jīng)改造獲得,在基因轉(zhuǎn)導與載體生產(chǎn)領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
這類細胞呈現(xiàn)典型成纖維細胞形態(tài),貼壁生長時呈梭形或不規(guī)則三角形,細胞間常以放射狀或漩渦狀排列。其遺傳背景源于小鼠,經(jīng)基因工程改造后,PA317 細胞能夠高效包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,這一特性使其成為生產(chǎn)重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的理想宿主。在培養(yǎng)過程中,PA317 細胞對營養(yǎng)要求不苛刻,常用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中即可良好生長。當細胞密度達到 80% - 90% 融合時,需使用胰酶 - EDTA 消化液進行傳代,傳代比例一般為 1:3 - 1:5,凍存時采用含 10% DMSO、90% 胎牛血清的凍存液,經(jīng)程序降溫后保存于液氮中。
PA317 細胞*突出的應用在于病毒載體生產(chǎn)。科研人員可將攜帶目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至 PA317 細胞,利用其細胞內(nèi)的包裝元件,生產(chǎn)具有感染能力的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。這些病毒顆??捎糜趯⑼庠椿?qū)腚y以轉(zhuǎn)染的細胞類型,如原代細胞、神經(jīng)細胞等,在基因功能研究、基因治療探索中具有重要意義。此外,PA317 細胞還可作為基因編輯工具的輔助細胞,通過包裝攜帶 CRISPR - Cas9 系統(tǒng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒,實現(xiàn)特定基因的敲除、敲入或調(diào)控,助力疾病相關(guān)基因的功能驗證。
PA317 細胞的優(yōu)勢顯著,其具有高效的病毒包裝能力,生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度高,能有效感染多種類型細胞;且細胞易于培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染,操作難度較低,適合大規(guī)模實驗需求。然而,該細胞也存在局限性,逆轉(zhuǎn)錄病毒載體整合到宿主基因組具有隨機性,可能引發(fā)插入突變風險;同時,PA317 細胞為小鼠來源,在應用于人體相關(guān)研究時,需謹慎評估種屬差異帶來的影響。
使用 PA317 小鼠胚胎成纖維細胞時,需嚴格控制細胞傳代次數(shù),避免因過度傳代導致病毒包裝能力下降;同時,要做好生物**防護,因其生產(chǎn)的病毒具有感染性。憑借高效的病毒包裝特性,PA317 細胞持續(xù)推動著基因工程與細胞治療研究的發(fā)展。
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